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20 Marcadores genéticos /Martínez et al./15-30

y Sougakoffa, 2014). Thabet, Karboul, Dekhil y de micobacterias, especialmente las del CMTB (Huang,
Mardassi propusieron una nueva técnica basada en la Chen, Hu, Chiou, Huang, Hsu, Lu y Shen, 2012), así
amplificación de IS6110 mediante PCR, con la cual es como en el diagnóstico diferencial de especies del
posible amplificar tanto el extremo 3’ como 5’ de estas complejo M. avium (Kim, Shin, Lee y Koh, 2013; Jang,
secuencias, con lo que se facilita la identificación de Koh, Huh, Kim, Jeon, Ki y Lee, 2014).
polimorfismos en la secuencia de inserción (Thabet et En 2003, Adékambi y Drancourt reportaron el
al., 2014). uso de la secuencia total de rpoB para identificar
especies de Mycobacterium de crecimiento rápido,
Gen rpoB pertenecientes a los grupos Mycobacterium chelonae-
El rpoB es un gen unicopia de 723 pb que contiene abscessus, Mycobacterium fortuitum y Mycobacterium
cuatro regiones conservadas y tres regiones variables smegmatis, las cuales provocan padecimientos de
(Kim, Lee, Lyu, Kim, Bai, Kim, Chae, Kim, Cha y Kook, las vías aéreas, piel y órganos blandos, por lo que su
1999). Se encuentran polimorfismos en su secuencia, correcta caracterización favorece la administración
especialmente en el codón 531, el cual se ha asociado del tratamiento, al conocerse su susceptibilidad a los
con la resistencia a la rifampicina. Kim et al., 1999, antibióticos.
obtuvieron la secuencia completa del gen rpoB en 44 Recientemente se le ha utilizado, junto con hsp65,
especies de micobacterias. Al amplificar un fragmento en la identificación de especies no tuberculosas
de 306 pb, localizado en una región muy conservada de micobacterias (Phelippeau Aboubaker, Musso y
del gen, determinaron que las especies pertenecientes Drancourt, 2015; Gingeras, Ghandour, Wang, Berno,
al CMTB presentaron secuencias idénticas, en tanto Small, Drobniewski, Alland, Desmond, Holodniy y
que otros aislados mostraron 93.1% de homología Drenkow, 1998; Nie, Duan, Huang, Lu y Chu, 2015).
con especies de micobacterias no patógenas. Este Incluso se ha logrado reconocer nuevas especies
resultado demostró que rpoB es un marcador específico de micobacterias o la incorporación de algunas ya
de identificación para las especies que conforman el existentes en la filogenia de este género.
CMTB (Kim et al., 1999).
En seguimiento al estudio sobre rpoB, este mismo Gen gyrB
equipo publicó en 2004 el resultado de la amplificación El gyrB es un gen de 2028 pb que codifica para la
mediante PCR dúplex de dos fragmentos específicos subunidad β de la DNA girasa (topoisomerasa II),
de este gen para micobacterias tuberculosas y no una enzima distribuida universalmente y esencial
tuberculosas, de 235 pb y 136 pb, respectivamente. para la replicación bacteriana. Al igual que rpoB, la
La publicación muestra la presencia de uno solo de secuencia de gyrB es muy conservada entre las
estos fragmentos en cada caso, según el grupo al que especies del CMTB, la homología es prácticamente
pertenezca la especie evaluada (Kim, Hong, Lee, Yun, de 100%, existiendo en ciertas ocasiones diferencias
Kim, Park, Bai y Kook, 2004). Con esto se demostró de un solo nucleótido entre algunas especies. Lo
que rpoB contiene secuencias muy conservadas entre anterior fue demostrado al amplificar mediante PCR
todas las especies de Mycobacterium, pero que al un fragmento de 1020 pb sobre DNA proveniente de
mismo tiempo incluye secuencias específicas que cultivos de especies de micobaterias no tuberculosas y
permiten identificar las especies que conforman el tuberculosas, observándose la amplificación únicamente
CMTB, aun en aislados clínicos. en este último grupo bacteriano. Resultados similares
Por otro lado, se ha empleado rpoB –junto con otros se obtuvieron de aislados a partir de muestras clínicas
genes como hsp65 y 16S rRNA– para detectar especies de pacientes diagnosticados con TB (Kasai, Ezaki y

Tequio, vol. 1, no. 2, enero-abril, 2018